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阳光玫瑰葡萄组培快繁技术

  阳光玫瑰葡萄属欧美杂交种,但具有典型的欧亚种特性。该品种果穗呈圆锥形,果穗质量 600 g 左右,大穗可达1 800 g,平均单果质量8~12 g;果粒着生紧密,呈椭圆形,黄绿色,果面有光泽,果粉少;果肉鲜脆多汁,有玫瑰香味,可溶性固形物含量在 20%左右,高可达 26%;鲜食品质,是目前市场上受欢迎的葡萄品种之一。为了进行良阳光玫瑰葡萄果苗的快速繁育,并保持该品种的良特征,宜采用组织培养方式进行繁殖。对葡萄进行组织培养的研究已多有报道,但是关于阳光玫瑰葡萄组织培养的论文仅有1篇。为了解影响阳光玫瑰组织培养效果的条件,此试验对阳光玫瑰葡萄的组织培养和快速繁殖技术进行研究,为阳光玫瑰葡萄的快速繁殖提供参考。

  1 试验材料与方法

  1.1 试验材料

  试验材料选取阳光玫瑰葡萄春季萌发的 10 cm 长的茎段,在室内去掉叶片,流水冲洗 30 min,去掉顶梢嫩的一段,剪成带 1 个芽的茎段。将茎段放在超净工作台上,先用70%的酒精浸泡60 s,然后用0.1%氧化汞消毒9 min,再用无菌水涮洗3次,每次5 min。在无菌接种盘或者无菌培养皿上,切掉葡萄带芽茎段两端,然后将茎段接种在启动培养基上。

  1.2 启动培养

快盈IV  B5 为葡萄外植体芽诱导的基本培养基,培养基中添加植物生长调节剂6-BA和NAA。6-BA的浓度分为4个梯度,分别为 0.5 mg/L、1.0 mg/L、1.5 mg/L 和 2.0 mg/L,NAA 的浓度为 0.5 mg/L。此次试验接种 30 瓶,每瓶 1 个外植体,设 3 次重复。外植体生长 30 d,调查统计葡萄无菌芽的诱导成功率。

  1.3 增殖培养

  将诱导成功的葡萄组培苗在用无菌操作条件下切下,接种到预先配制好的增殖培养基上。增殖培养的基本培养基与启动培养的基本培养基相同,6-BA的浓度分为 4 个梯度,从 0.5 mg/L 到 2.0 mg/L,按照每个梯度增加0.5 mg/L 设置,植物生长调节剂 IBA 的浓度选择 0.3 mg/L和0.5 mg/L。接种20瓶,每瓶4株苗,3次重复。生长30 d,调查统计组培苗的平均增殖系数和平均株高,筛选出适合组培苗增殖的6-BA与IBA浓度组合。

  1.4 生根培养

  将增殖培养基上生长 30 d 的组培苗,接种到生根培养基上。生根培养基选用 1/2B5,IBA 浓度设置 3 个梯度水平(从0.5 mg/L到1.5 mg/L,按照每个梯度增加0.5 mg/L设置),NAA浓度设置3个浓度(从0.1 mg/L到0.3 mg/L)。每处理接种20瓶,每瓶4株,3次重复。生长28 d,调查统计平均每株组培苗的生根数、平均根长和平均生根率,筛选出适合组培苗生根的IBA与NAA浓度组合。

  1.5 培养条件

  启动培养和增殖培养的培养基均添加白砂糖30 g/L,生根培养基添加白砂糖 20 g/L,每升培养基添加琼脂粉6.5 g,培养基 pH 值调整为 6.5。组培苗室的室内温度控制在(25±1)℃,光照时间每天14 h,光照强度为培养架正常两根日光灯管(距离组培瓶40 cm)。

  2 结果与分析

  2.1 启动培养

快盈IV  在葡萄组培苗诱导过程中,茎段基部先形成愈伤组织,然后腋芽开始萌发,一般15 d可以看到外植体芽长到1 cm 左右,25 d 外植体芽长到 3 cm 长,并且整个外植体没有细菌和霉菌污染,就确定为外植体芽诱导成功。从表1可看出,随着植物生长调节剂 6-BA 浓度的不断升高,芽的诱导率先升高后下降;葡萄成芽率高为76.7%,此时6-BA 的浓度为 1.5 mg/L。在 6-BA 浓度为 2.0 mg/L 时,茎段基部愈伤组织增多,影响芽的诱导。根据实验结果,筛选出佳培养基及植物生长调节剂配比为 B5+ 6-BA(1.5 mg/L)+ NAA(0.5mg/L)。

  2.2 增殖培养

  从表 2 可看出,将经过启动培养的芽接种到增殖培养基上,当 IBA 浓度为 0.3 mg/L 时,随着 6-BA 浓度的升高,阳光玫瑰葡萄的增殖系数不断升高,平均株高先降低后升高再降低;当 IBA 浓度为 0.5 mg/L 时,随着 6-BA 浓度的升高,阳光玫瑰葡萄的增殖系数先升高后降低,平均株高先升高后降低。当 6-BA 相同时,除了 6-BA 浓度为2.0 mg/L 时,植物生长调节剂 IBA 浓度为 0.3 mg/L 的增殖系数高于IBA浓度为0.5 mg/L的增殖系数,其余均为IBA浓度为0.5 mg/L的增殖系数高于IBA浓度为0.3 mg/L 的增殖系数。

  2.3 生根培养

  在增殖培养基上生长的丛生芽长到3 cm以上时,可以转接到葡萄生根培养基上。葡萄组培苗在生根培养基中 10 d 有根眼出现,20 d 根可长到 2 cm 左右,根数 2~4条。由表3可看出,在IBA相同浓度下,随着NAA浓度的升高,葡萄组培苗的平均生根条数、生根率和平均根长均呈现不断升高趋势;在 NAA 相同浓度下,随着 IBA 浓度的不断升高,平均生根条数呈现先升高后降低,平均根长表现为先升高后降低;NAA 浓度为 0.1 mg/L 和 0.2 mg/L时,随 IBA 浓度的不断升高,生根率呈现为不断升高;NAA 浓度为 0.3 mg/L 时,随 IBA 浓度的升高,生根率呈现为先升高后下降。根据实验结果,1/2B5+IBA(1.0mg/L)+NAA(0.3mg/L)的培养基适合阳光玫瑰葡萄生根,生根率达到96.5%。


来源:网络


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