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草莓组培快繁技术

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  一、培养程序和培养基

  5--6月于晴天的下午在健壮、无病的草莓刚抽出的匍匐茎上取茎尖,大小为0.3--0.4mm,作为组织培养的外植体。

快盈IV  用于草莓茎尖培养诱导芽分化的基本培养基为MS,附加6--BA0.5mg/L,NAA0.2mg/L,蔗糖30g/L,琼脂粉6.5g/L,pH值调至5.8--6.0。

快盈IV  在草莓茎尖的扩大繁殖阶段,采用MS培养基附加6-BA0.5mg/L、NAA0.01mg/L。扩大繁殖主要是将丛生苗分块即每5--7株切成一块,转入继代培养基。在转苗过程中,去掉原生叶片有利于新苗分化,在扩大繁殖中随时清除愈伤组织,有利于新苗增殖和生长。

  诱导生根培养基用1/2MS附加不同浓度IBA。试验表明:以IBA0.1mg/L的浓度处理的生根率高,为100%,平均根条数为2.4条。不加IBA及IBA浓度超过0.2mg/L,多数苗都是先于苗基切口处产生愈伤组织,随后在愈伤组织上分化生根,致使成活率大大降低。

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快盈IV  二、操作技术要点及培养条件

  (1)灭菌与接种

  预处理   为了灭菌彻底,常把接种材料先进行湿润处理,使灭菌剂能顺利地渗入材料。可用多种湿润剂,我们采用的是75%的酒精,湿润的时间为半分钟至1分钟。

快盈IV  灭菌处理   在草莓组织培养中常用灭菌剂的种类很多。我们曾用过次氯酸钠10%水溶液(含有效氯0.4--0.5%),浸泡接种材料10--15分钟;次氯酸钙(漂白粉),用其饱和上清液,浸泡接种材料15--30分钟;过氧化氢10--12%水溶液浸泡10--20分钟;新洁尔灭5--10%水溶液,浸泡10--15分钟;升汞0.1%水溶液,浸泡8--10分钟。其中前4种灭菌剂对接种材料比较安全,但因灭菌时间较长,常常使接种材料的外层氧化变褐,以致影响培养效果。升汞有很强的杀菌能力,但浸泡时间稍长会造成接种材料中毒。因此,在草莓组织培养中,如把握好时间,升汞是应用较多的灭菌剂。灭菌后的接种材料,要用无菌水充分清洗,通常要换水3--5次。

  接种   以培养无病毒苗为主要目的的草莓组织培养,所接种的茎尖材料很小,在接种时首先要求准确熟练地剥取茎尖生长点,并使用固体培养基比较适宜,接种时应注意不能将整个茎尖埋入培养基中。培养基须用1--1.1大气压热压灭菌20分钟。

快盈IV  从材料接种到生根苗长成,这期间的培养温度一般应稳定在25±2℃。每日光照12小时,光强发2000Lx为宜。培养室温度在18--26℃范围内,瓶苗可以正常生长及发根,但在28℃以上时,绿苗普遍变黄,生根率降低,根尖发黄老化,幼苗易产生玻璃化现象。


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